الاختبار الحلقي

النشاط الثاني

الاختبار الحلقي

تحديد كمية الأجسام المضادة باستخدام الاختبار الحلقي



حفظ النشاط

عندما يقوم مولد الضد(ANTIGEN ) بمهاجمة الجسم، يقوم بالارتباط مع الأجسام المضادة الخاصة به، جزء صغير من الجسم المضاد فقط يساهم في هذا الارتباط و يسمى هذا الجزء موقع الارتباط (BINDING SITE) و ينطبق هذا الأمر على مولد الضد (ANTIGEN) لان جزء صغير منه فقط يدخل في هذا الارتباط و يسمى هذا الجزء بمحدد مولد الضد (ANTIGENIC DETERMINATION) .

في العادة يكون لمولد الضد العديد من المحددات المختلفة، كما هو موضح في الشكل التالي:-








شكل2أ : المحددات المختلفة لمولد الضد





بما إن الأجسام المضادة لها موقعان للارتباط، ففي الحالة التي يتم فيها مزج كمية متساوية من الأجسام المضادة و مولد الضد، فإن الأجسام المضادة سوف تقوم بتكوين جسر جزيئي بين جزيئين من مولد الضد (كما هو موضح في الشكل 2.2)، فيتكون لدينا مركب معقد(ANTIBODY ANTIGEN COMPLEX) من الأجسام المضادة و مولد الضد الغير ذائب في الماء وهذا المركب يمكن رؤيته بوضوح.

يمكن تحديد كمية هذا المركب المعقد بإستخدام كميات متفاوتة من مولد الضد و ذلك عن طريق إضافتها إلى مصل يحتوي على أجسام مضادة خاصة بمولد الضد. بمعنى آخر، لدينا مجموعة من أنابيب الاختبار فيها كمية معروفة من المصل المضاف إليها كمية مختلفة من مولد الضد وعندما تكون كمية مولد الضد المضافة مناسبة، سيكون لدينا أعلى مستوى من المركب المعقد للأجسام المضادة و مولد الضد الغير ذائب، و هذا المدى المناسب يسمى مدى التوازن (EQUILIBRIUM RANGE) عند زيادة كمية مولد الضد المضاف، فإن كمية المركب المعقد للأجسام المضادة و مولد الضد تقل، و هذا يسمى زيادة مدى مولد الضد(EXCESS ANTIGEN RANGE) كما هو موضح بالشكل 2ب،. أما عندما تكون كمية مولد الضد أقل من المدى المناسب يكون هناك أيضا نقصان في كمية المركب المعقد للأجسام المضادة و مولد الضد و يبقى جزء منه ذائبا، وهذا يسمى زيادة مدى الأجسام المضادة كما هو موضح بالشكل 2ب.











شكل2ب: يوضح العلاقة بين تركيز كمية المركب المعقد للأجسام المضادة و مولد الضد، فعند زيادة كمية مولد الضد المضاف، فإن كمية المركب المعقد للأجسام المضادة و مولد الضد تقل،





تكون احتمالية تكون المركب المعقد الغير ذائب من ارتباط موقعا الربط للجسم المضاد بمولدا ضد مختلفين أكثر منها للارتباط بمولد ضد واحد.

من أجل معرفة إذا كان لدينا أجسام مضادة في مصل ما، يمكن استخدام اختبار نوعي؛ و ذلك بإضافة محلول يحتوي على مولد ضد إلى أنبوب اختبار يحتوي على مصل دم. لاحظ تكون راسب في داخل المصل.

الاختبار الحلقي The Ring Test



أهداف التجربة:-

مقياس نوعي لفحص إمكانية ارتباط الأجسام المضادة المستخرجة من الأرانب مع مولد الضد البروتيني(زلال بويضة الدجاجة) (ALBUMIN) (OVA)



المواد و المعدات المطلوبة:-



1. 1 مل من مصل أرنب تم إكسابه مناعة ضد زلال بويضة الدجاجة(OVA).

2. 0.5 مل من محلول زلال بويضة الدجاجة (OVA) بتركيز 1 ملغم / مل.

3. 0.5 مل من مولد ضد آخر مثلا ( زلال مصل بقري) (BSA) بتركيز 1 ملغم / مل.

4. 0.5 مل من محلول الفوسفات الملحي المنظم (PBS).

5. 3 أنابيب اختبار.

6. سحاحه0.2 مل عدد 4 أو أربع قطارات طبيه.



الطريقة:-



1- قم بإضافة 0.2 مل (حوالي 3 قطرات) من مصل الأرنب الذي تم إكسابه مناعة ضد زلال بويضة الدجاجة (OVA) إلى كل من أنابيب الاختبار الثلاثة.

2. بحذر قم بإضافة 0.2 مل (حوالي 3 قطرات) من محلول مولد الضد إلى جدار أنبوب الاختبار فوق المصل.

أضف 0.2 مل من محلول زلال بويضة الدجاجة إلى أنبوب الاختبار الأول.

أضف 0.2 مل من محلول زلال المصل البقري (BSA) إلى أنبوب الاختبار الثاني.

أضف 0.2 مل من محلول الفوسفات الملحي المنظم (PBS) إلى أنبوب الاختبار الثالث.

3. قم بترك أنابيب الاختبار لمدة 10 دقائق على درجة حرارة الغرفة.

4. قم بفحص و مراقبة تكون الطبقة البيضاء من الراسب بين المصل و المحلول الذي أضيف عند النظر إلى أنبوب الاختبار، الراسب يجب إن يكون على شكل حلقي ( أنظر الشكل 2ج).




شكل2ج: رسم توضيحي لنتائج الاختبار الحلقي لاحظ تكون الطبقة البيضاء من الراسب بين المصل و المحلول في الأنبوب الأول.





الخلاصة و المناقشة:-



إفترضنا في هذا الفحص إن مصل الأرنب الذي تم إكسابه مناعة ضد زلال بويضة الدجاجة (OVA) يجب إن يكون فيه أجسام مضادة خاصة للبويضة (OVA).



1. ما هو المعيار(المرجع) الذي تم استخدامه في هذه التجربة؟ و ما هو الهدف من استخدامه.

2. هل عدم تكون الحلقة يعني عدم وجود أجسام مضادة للبويضة(OVA) في مصل الأرنب؟

3. في رأيك ما هي العوامل التي تؤثر على معدل تكون الحلقة؟

4. اقترح طريقه أخرى يمكن استخدامها في تحديد تركيز الأجسام المضادة في الراسب؟







في هذه التجربة تم عمل قياس نوعي للراسب من حيث ارتباط الأجسام المضادة و مولد الضد. حيث انتشرت الأجسام المضادة و مولد الضد في أنبوب الاختبار بحيث كانت تراكيزهم أكثر أو أقل في مناطق مختلفة في أنبوب الاختبار.

في حالة الاتزان كانت هناك تراكيز مناسبة من الأجسام المضادة و مولد الضد حيث إن الراسب يتكون على شكل حلقة.

الاستعمال العام لهذه الطريقة ( فحص الراسب الكمي) يكون لحساب كميات مجموعات مختلفة من الغلوبيولين المناعي(IMMUNOGLOBULIN) في مصل المرضى التي يتفاعل مع مولد ضد معين